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牛血清白蛋白到底是什么樣的試劑

發布日期:2025-06-19 13:42:57   瀏覽量 :221
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牛血清白蛋白(BSA)是牛血清中的一種球蛋白,包含607個氨基酸殘基,分子量為66.446KDa,等電點為4.7。


應用: 牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應用,例如在WB實驗中加入BSA,通過提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。 防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性減輕不利環境因素,如加熱、表面張力及化學因素引起的變性。


測定蛋白濃度 按50:1配置BCA工作液。 10ulC液(蛋白標準)+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。 再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。 分別加PBS定容至20ul。 各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時。 用酶標儀測定蛋白濃度:測定A562,依標準曲線算出蛋白濃度。


SDS-PAGE電泳

1、制膠:按比例配制分離膠,緩緩地搖動溶液,使激活劑混合均勻,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃極中,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進入凝膠溶液中,靜置40min。 同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時不要過于劇烈以免引入過多地氧氣。 吸去不連續系統中下層分離膠上的水分,連續平穩的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,靜制60min以上以保證完全聚合。

2、預電泳:將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,小心拔去梳子,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預電泳20-30min。 (目的是清除凝膠內的雜質, 疏通凝膠孔徑以保證電泳過程中電泳的暢通)。

3、樣品準備:首先計算上樣體積,然后按樣品上樣buffer=4:1的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,冰上5分鐘。

4、加樣:預電泳后依次加入標準品(Marker)和待分析樣品。 (加樣時間要盡量短,以免樣品擴散,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應。每個泳道加5ul 。)

5、電泳:加樣完畢,選擇80V恒壓進行電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿到達兩膠交界處(一般約20分鐘),更換至100V恒壓電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿下至凝膠末端處,即停止電泳(一般約為1小時20分鐘)。


*以上內容來自網絡

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