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lip脂質體轉染的操作步驟

發布日期:2025-05-27 17:21:00   瀏覽量 :94
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操作步驟:

(1) 細胞培養:取 6 孔培養板 (或用 35 mm 培養皿),向每孔中加入 2 mL 含 1~2×105 個細胞培養液,37℃ CO2 培養至 40%~60% 匯合時 (匯合過分,轉染后不利篩選細胞)。

(2) 轉染液制備:在聚苯乙稀管中制備以下兩液 (為轉染每一個孔細胞所用的量)A 液:用不含血清培養基稀釋 1-10 μg DNA,終量 100μL,B 液:用不含血清培養基稀釋 2-50 μgLR,終量 100μL,輕輕混合 A、B 液,室溫中置 10-15 分鐘,稍后會出現微濁現象,但并不妨礙轉染 (如出現沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過高所致,應酌情減量)。

(3) 轉染準備:用 2 mL 不含血清培養液漂洗兩次,再加入 1 mL 不含血清培養液。

(4) 轉染:把 A/B 復合物緩緩加入培養液中,搖勻,37℃ 溫箱置 6~24 小時,吸除無血清轉染液,換入正常培養液繼續培養。

(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉染法相同。

注意:轉染時切勿加血清,血清對轉染效率有很大影響。


*以上內容來自網絡

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